Реакция иммуноферментного анализа

Полезная справочная информация для специалистов сельского хозяйства и агропрома.


Реакция иммуноферментного анализа


Реакция иммуноферментного анализа
Ключевые слова: реакция иммуноферментного анализа


Рассмотрим применение реакции иммуноферментного анализа (ИФА) на примере диагностики пироплазмоза (бабезиоза). Для проведения реакции иммуноферментного анализа используется специальный диагностикум, который включает в себя необходимые биологические и химические компоненты.

Состав биологических компонентов диагностикума для реакции иммуноферментного анализа:

• антиген пироплазменный лиофилизированный по 2 см³, 2 ампулы (флакона) (№1).

• сыворотка позитивная (пироплазменная) лиофилизированная 2 см3, 1 ампула (№2).

• сыворотка негативная лиофилизированная (контроль) 2 см3, 1 ампула (№3).

• конъюгат антивидовой лиофилизированный по 2 см3, 2 ампулы (№4).

В состав химических компонентов для реакции иммуноферментного анализа: входит 5-аминосалициловая кислота лиофилизированная, гидроперит лиофилизированный, детергент, фосфатно-буферный раствор, натрий хлористый, а также планшет полистироловый.

Каждая ампула (флакон) компонентов для проведения реакции иммуноферментного анализа должна иметь этикетку, где должны быть указаны необходимые выходные данные.

Вышеуказанные компоненты используются в реакции иммуноферментного анализа при необходимости диагностики кровепаразитарных заболеваний, в данном случае мы говорим о пироплазмозе. С помощью этих компонентов можно обнаружить пироплазменные антитела. Для этого берут пробы у животных, больных или подозреваемых в заболевании, а потом определяют, есть ли в сыворотке крови антитела или они отсутствуют.

Для правильного проведения реакции иммуноферментного анализа важно соблюдать четкий порядок применения компонентов. Сначала все компоненты приводят в готовность, их растворяют, доводят до нужного уровня концентрации веществ. На следующем этапе собственно проводят постановку реакции иммуноферментного анализа. Она проводится в несколько этапов. Сначала в лунки плашки вносится содержимое ампул с разведенным антигеном, оно инкубируется 3-4 часа. В конце этого этапа реакции иммуноферментного анализа получают подсушенный планшет с образцами. На втором этапе в маркированные лунки вносят негативную сыворотку, позитивную сыворотку и испытуемые пробы сыворотки крови. Выдерживают лунки при необходимой температуре от часа до пятнадцати часов. По истечении необходимого времени лунки отмывают от не связавшихся сывороток, добавляют в них иммуноферментный конъюгат, снова инкубируют в течение 1 часа 15 минут, снова отмывают раствором ТФБР. На заключительном этапе реакции иммуноферментного анализа во все лунки вносят субстратную смесь, которую готовят сразу перед применением.

Через сорок-шестьдесят минут после этого можно приступать к учету результатов реакции иммуноферментного анализа. Образовавшийся реакционный продукт оценивают с точки зрения его окраски, для чего сверяются с контрольными образцами. О положительном результате скажет интенсивное коричневое окрашивание. Сомнительный результат будет окрашен в светло-коричневый цвет. Отрицательный результат – это отсутствие окрашивания или окрашивание на уровне отрицательного контроля.

Назад в раздел