Ветеринария

09.01.2026

Изучение иммуногенных свойств вакцины против аденовирусного гепатита с тельцами-включениями

Введение

Аденовирусы птиц (FAdV) — безоболочечные двухцепочечные ДНК-содержащие вирусы, входящие в семейство Adenoviridae, относящиеся к роду Aviadenovirus [1, 2], вызывающие эрозию желудка, синдром гидроперикардита и гепатит с тельцами-включениями [3].

Гепатит с тельцами-включениями (IBH) является экономически значимым заболеванием птиц и вызывается серотипами FAdV-7, 8a, 8b (вид E) и FAdV- 2 и 11 (вид D), поражающим как бройлеров, так и птиц яичного направления продуктивности в возрасте 2–5 недель. Летальность заболевания составляет от 2% до 30% [3, 4, 5]. Заболевание в основном характеризуется некротическим поражением печени и базофильными внутриядерными включениями в гепатоцитах [6].

Синдром гидроперикардита (HHS) — острое заболевание,   вызываемое   серотипом   FAdV-4 вид С, поражает бройлеров в возрасте 3–6 недель. Летальность заболевания составляет 30–70%. Заболевание характеризуется гепатитом, базофильными внутриядерными включениями в гепатоцитах, гидроперикардитом, нефрозом [7, 8, 9].

В последние годы гепатит с тельцами-включениями стал вызывать растущую обеспокоенность в птицеводческой отрасли по всему миру, в связи с чем разработка эффективных вакцин стала значимым направлением исследований по всему миру [2].

С целью вакцинопрофилактики HHS и IBH используют несколько видов вакцин: субъединичные, живые, аутогенные, инактивированные. Для профилактики аденовирусных инфекций разработаны и применяются преимущественно инактивированные вакцины, чаще всего используются органно-тканевые формол-вакцины [10].

В России зарегистрировано только три вакцины против аденовирусов птиц первой группы. Все направлены на борьбу с FAdV-4, вызывающим синдром гидроперикардита кур [11, 12]. При этом нет ни одной зарегистрированной вакцины против FAdV, вызывающих гепатит с тельцами-включениями.

В свете вышеизложенного перед сотрудниками лаборатории профилактики болезней птиц была поставлена цель разработать средство специфической профилактики против гепатита с тельцами- включениями.

 

Материалы и методы

Для проведения эксперимента было сконструировано восемь опытных образцов вакцины. Образцы 1–8 содержали в своем составе 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 и 40% тканевую суспензию тушек эмбрионов кур SPF, инфицированных аденовирусом птиц Е, инактивированную димером аминоэтилэтиленимина и сорбированную на 3% геле гидроокиси алюминия в соотношении 50 : 50.

Оценочным показателем в эксперименте по подбору оптимальной концентрации антигена аденовируса птиц Е в составе инактивированной вакцины и определению защитных титров антител против аденовируса птиц Е был титр антител в ИФА, обеспечивающий защиту от контрольного заражения не менее чем у 80% привитых цыплят.

Для опыта было сформировано 9 групп цыплят СПФ в возрасте 5 суток по 10 голов в каждой, из которых восемь были иммунизированы экспериментальными образцами вакцины 1–8 (группы 1–8 соответственно). Прививной объем составлял 0,5 см3, вакцину вводили внутримышечно, в две точки по 0,25 см3. Группа 9 оставалась интактной (невакцинированный контроль).

До прививки и далее с периодичностью 7 суток от птиц отбирали пробы сывороток крови для исследований. В ИФА согласно методическим указаниям устанавливали концентрацию (титр) антител к аденовирусу птиц Е [13].

Вакцину считали антигенно-активной, если через 28 суток после вакцинации не менее чем у 80% привитых птиц титр антител к аденовирусу птиц Е обеспечивал защиту привитых цыплят от контрольного заражения суспензией печени от цыплят, павших от гепатита с тельцами-включениями. При этом рост титров антител у птиц невакцинированной контрольной группы должен отсутствовать.

Для оценки защиты привитых цыплят от контрольного заражения через 28 суток после вакцинации птиц переводили на содержание в изолированные клетки и подвергали процедуре контрольного заражения, которая заключалась в инокуляции материала, содержащего живой аденовирус птиц вида Е, внутримышечным способом в дозе 4,0 lg ЭИД /0,5 см3. Затем за цыплятами вели клинические наблюдения в течение 10 суток на предмет заболеваемости (атаксия, угнетение, диарея) и гибели. Диагноз подкрепляли посмертным осмотром внутренних органов, отмечая характерные патологические изменения (печень увеличена в объеме, с участками глинистого цвета, ломкая; селезёнка увеличена в объёме; почки набухшие, светло-красного цвета, канальцы заполнены оксалатами), и выявлением телец-включений при микроскопическом исследовании фиксированных и окрашенных мазков-отпечатков печени [14].

 

Результаты и обсуждение

Первичные результаты подвергали обработке. В каждой подопытной группе вычисляли среднегрупповые значения, которые сравнивали с соответствующими показателями, установленными до вакцинации. Результаты обработки первичных данных представлены в таблице.

Цыплята до вакцинации были серонегативными к аденовирусу птиц Е. Образцы вакцины, изготовленные на основе антигенсодержащих суспензий 5, 10 и 15% концентрации, не вызывали образование антител у привитых цыплят на протяжении всего эксперимента. Контрольное заражение цыплят этих групп через 28 суток после вакцинации привело к заболеванию большей части цыплят, выражавшегося сильным угнетением, отказом от корма, диареей. Посмертный осмотр внутренних органов выявил дистрофические поражения печени (рис. 1), в подготовленных мазках-отпечатках в поле микроскопа в гепатоцитах обнаруживались множественные тельца-включения (рис. 2).

Рис. 1. Поражения печени у цыплят, инфицированных полевым изолятом аденовируса птиц Е

Рис. 2. Формирование внутриядерных базофильных телец-включений (указаны стрелками) в гепатоцитах печени цыплёнка, зараженного полевым изолятом FAdV-E аденовируса. Гематоксилин–эозин. Ув.: ×400

Препараты, изготовленные из 20 и 25% суспензии, на 21 сутки после введения инициировали слабый гуморальный ответ без прироста титров антител к 28 суткам наблюдений, которые не обеспечивали защиту цыплят от контрольного заражения: заболеваемость в группах составляла 50–80%, которая подтверждалась патологоанатомическими и цитологическими исследованиями, при этом у здоровых цыплят описанной выше паткартины не выявляли, а в мазках-отпечатках печени отмечали единичные тельца-включения. Включение в состав вакцины 30, 35 и 40% суспензии антигена аденовируса птиц Е обеспечило её высокую антигенную и иммуногенную активность: так, препарат на основе 30% суспензии к 28 суткам после введения вызывал накопление антител к аденовирусу птиц Е в титре 654±98 (при положительном значении 600), который обеспечивал защиту 90% цыплят в группе от контрольного заражения живым вирусом. Увеличение концентрации суспензии до 35 и 40% усиливало антигенные свойства инъецируемых образцов вакцин, обеспечивая уже на 21 сутки после их введения образование титров антител в значениях 1078±131 и 1771±335 соответственно, которые продолжали расти и к 28 суткам составляли 1872±107 и 2474±291. Препараты с такой антигенной активностью через 28 суток обеспечивали 90– 100% защиту иммунизированного поголовья от контрольного заражения: цыплята в остром опыте не проявляли клинических признаков заболевания, патологоанатомические и цитологические исследования также не выявляли патогенного воздействия вируса как на макро-, так и на микроуровне.

Невакцинированные цыплята контрольной группы в остром опыте, проводившемся параллельно с контрольным заражением остальных групп на 28 сутки наблюдений, на 3–4 сутки проявляли клинические признаки, выражавшиеся в угнетении, атаксии, опирании грудного киля на пол клетки, диарее; патологоанатомические изменения в органах гуманным образом убитых птиц проявлялись в виде поражения печени (ломкая, глинистого цвета либо с участками глинистого цвета) (рис. 1) и почек (набухшие, канальцы заполнены оксалатами); при цитологическом исследовании мазков- отпечатков печени в поле микроскопа обнаруживали множественные тельца-включения в гепатоцитах (рис. 2).

Анализ результатов исследований сывороток крови цыплят, привитых образцами вакцины, содержащими разные концентрации антигенного компонента, и контрольного заражения показывает, что препарат, изготовленный из 30% суспензии антигена, на 28 сутки вызывает формирование титров антител в минимальном положительном значении (1 : 600) в ИФА, обеспечивающем 90% защиту привитых цыплят от контрольного заражения аденовирусом птиц Е.

Антигенная и иммуногенная активность экспериментальной вакцины в зависимости от концентрации антигена аденовируса птиц Е

Заключение

Было показано, что для того, чтобы вакцина могла обеспечить формирование антител к аденовирусу птиц Е в минимальном положительном значении 1 : 600, дающем защиту цыплят от заражения гомологичным вирусом, необходимо, чтобы в составе препарата концентрация тканевой суспензии, содержащей антиген аденовируса Е, была не ниже 30%.

                                                                                                                                               Литература

1. Gupta, A. Immunogenicity and protective efficacy of virus like particles and recombinant fiber proteins in broiler breeder vaccination against fowl adenovirus (FAdV) 8b / A. Gupta [et al.] // Vaccine. — 2017. — Vol. 35, No. 20. — P. 2716–2722.

2. De Luca, C. Recombinant Fowl aviadenovirus E (FAdV E) penton base vaccination fails to confer protection against inclusion body hepatitis (IBH) in chickens / C. De Luca, A. Schachner, M. Hess // Avian Pathology. — 2023. — Vol. 52, No. 4. — P. 277–282.

3. Gupta, A. Inactivated and live bivalent fowl adenovirus (FAdV8b+ FAdV11) breeder vaccines provide broad-spectrum protection in chicks against inclusion body hepatitis (IBH) / A. Gupta [et al.] // Vaccine. — 2 gef. 018. — Vol. 36, No. 5. — P. 744–750.

4. Günes, A. Real-time PCR assay for universal detection and quantitation of all five species of fowl adenoviruses (FAdV-A to FAdV-E) / A. Günes [et al.] // Journal of Virological Methods. — 2012. — Vol. 183, No. 2. — P. 147–153.

5. Choi, K. S. Epidemiological investigation of outbreaks of fowl adenovirus infection in commercial chickens in Korea / K. S. Choi [et al.] // Poultry Science. — 2012. — Vol. 91, No. 10. — P. 2502–2506.

6. Dar, A. Pathotypic and molecular characterization of a fowl adenovirus associated with inclusion body hepatitis in Saskatchewan chickens / A. Dar [et al.] // Avian Diseases. — 2012. — Vol. 56, No. 1. — P. 73–81.

7. Du, D. Cell-culture derived fowl adenovirus serotype 4 inactivated vaccine provides complete protection for virus infection on SPF chickens / D. Du [et al.] // Virusdisease. — 2017. — Vol. 28, No. 2. — P. 182–188.

8. Kim, M. S. An inactivated oil-emulsion fowl Adenovirus serotype 4 vaccine provides broad cross-protection against various serotypes of fowl Adenovirus / M. S. Kim [et al.] // Vaccine. — 2014. — Vol. 32, No. 28. — P. 3564–3568.

9. Mansoor, M. K. Preparation and evaluation of chicken embryo-adapted fowl adenovirus serotype 4 vaccine in broiler chickens /

M. K. Mansoor [et al.] // Tropical Animal Health and Production. — 2011. — Vol. 43, No. 2. — P. 331–338.

10. Schachner, A. Fowl adenovirus-induced diseases and strategies for their control—a review on the current global situation /

A. Schachner [et al.] // Avian Pathology. — 2018. — Vol. 47, No. 2. — P. 111–126.

11. Борисов, В. В. Разработка средств и методов диагностики и специфической профилактики аденовирусных болезней кур: автореф. дис. … д-ра вет. наук : спец. 16.00.03 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» / В. В. Борисов. — Владимир, 2006. — 350 с.

12. Панкратов, С. В. Вакцина против синдрома гидроперикардита птиц (Авивак-АдВг) / С. В. Панкратов, Н. Д. Придыбайло, Н. В. Крон // Российский ветеринарный журнал. — 2009. — № 2. — URL: https://cyberleninka.ru/article/n/vaktsina-protiv- sindroma-gidroperikardita-ptits-avivak-advg (дата обращения: 19.07.2023).

13. Методические рекомендации по выявлению антител к аденовирусу птиц вида Е иммуноферментным методом при тестировании сывороток в одном разведении / М. А. Волкова, П. С. Ярославцева, А. А. Козлов, Д. Б. Андрейчук; ФГБУ «ВНИИЗЖ». — Владимир, 2023. — 36 с.

14. Методические рекомендации по цитологической диагностике аденовирусной инфекции птиц: техника обнаружения внутриядерных телец включений в гепатоцитах / Ю. Р. Зеленский, И. Н. Громов, М. С. Волков [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ». — Владимир, 2025. — 48 с.

Количество показов: 152
Автор:  Ю. Зеленский, Д. Долгов, Н. Мороз, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), г. Владимир