Ветеринария

20.02.2012

Применение метода ИФА в птицеводстве

Цены на ВАКЦИНЫ смотрите на сайте СЕЛЬХОЗТОРГИ.РФ

---

А.А. Черников, технический консультант компании «БиоЧек» в странах СНГ,

А.В. Клинков, ООО «Симбио»

Наблюдая за эволюцией распространения болезней птицы в мире, становится понятным, что пришло время концентрировать свои усилия на предотвращении заболеваний, а не на их лечении. К такому выводу подталкивают минимум две предпосылки. Во-первых, сужается гамма разрешенных к применению в птицеводстве лекарственных средств. Во-вторых — расходы, которые возникают в результате заболевания птицы (даже если поголовье вылечено), становятся слишком большими.

Исходя из этого, стратегия предотвращения заболеваний должна базироваться на качестве обслуживания ферм, генетической стойкости птицы и на комплексе диагностических и профилактических мероприятий. Именно максимально ранняя диагностика инфекционных заболеваний является гарантом снижения возможных экономических потерь.

В этой статье мы остановимся на одном из наиболее перспективных методов диагностики — иммуноферментном анализе (ИФА, ELISA).

Метод ИФА характеризуется высокой чувствительностью, скоростью получения результатов, массовостью исследований. Благодаря простоте, специфичности и высокой чувствительности метод ИФА очень удобен для скрининга большого количества образцов, при этом исследуемой сыворотки требуется в микродозах (1 мкл). Следует отметить, что ИФА также является безопасным, так как используются инактивированные антигены. В отличие от других методов диагностики ИФА позволяет использовать автоматическое оборудование: для учета результатов — спектрофотометр и для промежуточных стадий — промыватель планшет (вошер). Это значительно ускоряет, автоматизирует работу лаборатории, снижает трудовые затраты и влияние человеческого фактора на конечный результат.

Принцип метода основан на способности антител связывать соответствующие антигены, образуя комплексы «антиген–антитело», которые затем после обработки другими реагентами приобретают видимую глазом окраску. Интенсивность последней (оптическую плотность) определяет прибор — спектрофотометр. Значение оптической плотности прямо пропорционально количеству антител в сыворотке крови, что затем пересчитывается в титр.

В настоящее время возможность постановки ИФА-метода в собственной лаборатории имеет практически любое предприятие среднего размера. Оборудование не занимает много места, не требует специального обслуживания и навыков работы. Компоненты для проведения самой реакции поставляются в готовых коммерчески продаваемых наборах — тест-системах.

В течение последних лет на рынке России появилось много производителей ИФА-наборов. Среди них заслуженное место занимают наборы голландского производства «BioChek B.V.» — за их неизменное качество, оптимальную цену и, самое главное, — преимущества в работе.

Использование иммуноферментного анализа от «BioChek» предоставляет следующие возможности:

1. Создать обственную систему контроля (референтный контроль и референтная куриная сыворотка), что позволяет быть уверенным в правильности работы компонентов набора, соблюдения условий и методики реакции.

2. Составить и проанализировать эпизоотическую ситуацию относительно особенно опасных вирусных болезней птицеводства. Оценить степень иммунитета поголовья и потенциальных проблем со здоровьем и продуктивностью птицы.

3. Создать собственную базу титров птицефабрики в программе «BioChek», что в последующем очень облегчает обработку и хранение результатов. Следует понимать, что интерпретация полученных результатов нуждается в опыте, который нарабатывается путем сбора и хранения информации и дальнейшего сравнения ее с ранее полученными результатами. Только длительный, систематический контроль стад позволяет пользователям программы «BioChek» установить свои собственные стандарты для ожидаемых (целевых) титров, то есть создать базовые данные для своих стад. Из этого следует, Это необходимо потому, что базовые данные являются специфическими для каждой птицефабрики и могут изменяться в зависимости от породы и возраста птицы, типа вакцин и программ вакцинаций, а также других возможных различий в условиях содержания птицы.

4. С помощью методических указаний «BioChek» разработать и применить схему серомониторинга для ремонтных, родительских и товарных стад.

5. Провести мониторинг вакцинации. При этом мы оценивали и оптимизировали такие необходимые параметры программы вакцинации, как время проведения вакцинации (прогнозирование даты вакцинации) согласно уровню материнских антител, вид программы (какая вакцина — живая или инактивированная, промежуточная или горячая, количество вакцинаций), метод применения вакцины.

При создании собственных базовых данных по титрам и коэффициенту изменчивости (CV) это дает нам возможность провести оценку эффективности программы вакцинации (рис. 1, 2).

Рис. 1. Иммунограмма мониторинга сывороток крови цыплят бройлеров после вакцинации против болезни Ньюкасла на 12-й день, М±m, n=23

Вакцинация товарного бройлера на 12-й день привела к желаемому результату, то есть у данного стада выработан достаточный уровень защиты к ньюкаслской болезни до конца цикла выращивания.

Рис. 2. Иммунограмма мониторинга сывороток крови цыплят бройлеров после вакцинации против болезни Ньюкасла на 21-й день, М±m, n=23

Вакцинация товарного бройлера на 21-й день привела к угрожающей ситуации, когда определенное время данное стадо было не защищено, и в это время возможно проникновение вируса Ньюкаслской болезни к незащищенной восприимчивой птице.

Серологический мониторинг является важным инструментом в разработке и поддержке эффективных программ вакцинаций. Его целью является своевременное обеспечение информацией об иммунном статусе, полагаясь на которую, можно проводить эффективные мероприятия по снижению производственных расходов и минимизации убытков от болезней.

Но все же следует понимать, что ИФА — это не панацея от всех проблем птицеводства; для установления достоверного диагноза необходимо серологические исследования проводить в комплексе с клиническими наблюдениями и другими лабораторными исследованиями. В птицеводстве есть много разных методов применения вакцин. При аэрозольной однократной вакцинации с помощью ИФА невозможно сделать анализ качества проведенной вакцинации, так как создается местный иммунитет. При применении других методов, когда создается гуморальный иммунитет, мы должны оценивать интенсивность, однородность и стойкость ответа в титрах после введения вакцины.

Рис. 3. Гистограмма мониторинга сывороток крови цыплят бройлеров (при забое) после проведенной вакцинации против болезни Гамборо в 16-дневном возрасте, М±m, n=23

Рис. 4: Гистограмма мониторинга сывороток крови цыплят бройлеров (при забое) после проведенной вакцинации против болезни Ньюкасла в 12-дневном возрасте, М±m, n=23

Как видим, выявление уровня антител имеет смысл при сравнении с известными стандартами и если они оцениваются по истечении определенного времени после вакцинации. Если титры антител повышаются после иммунизации, то это свидетельствует об успешности проведенной вакцинации. Если титры в части поголовья высокие, в то время как в другой части — нулевые, то тестирование показывает, что стадо, возможно, инфицировано или плохо проведена вакцинация.

6. Есть еще одна очень важная способность программного обеспечения «BioChek»: это возможность провести профилирование племенных стад.

Мониторинг племенной птицы проводится в установленные моменты после первичной и вторичной вакцинации. Первичный ответ антител в сыворотке крови птицы после контакта с инфекционным агентом или вакцинации можно обнаружить уже через 7–10 дней, и обычно они достигают пика в течение 2–3 недель. Уровень антител обычно снижается через несколько дней после пика, поскольку патоген инактивируется и выводится. Вторичный иммунный ответ наступает быстрее после вторичного заражения или ревакцинации, чем при первичном ответе. Обычно уровень антител при вторичном ответе снижается медленнее в течение более длительного времени. Правильно проведенная первичная вакцинация очень важна для получения высоких и стойких титров в течение 40-недельного производительного цикла. Однако сам факт использования эффективных вакцин не является гарантом защиты поголовья от вирусных болезней. Важную роль в профилактике этих болезней играет схема использования вакцинных препаратов. Комбинированное применение живых и инактивированных вакцин позволяет совместить в себе все их преимущества и преследует две важные цели — как защиту кур от вирусных болезней на протяжении всего жизненного периода, так и создание напряженного и длительного иммунитета у цыплят, которые были получены от этих кур.

Выводы:

1. Иммуноферментный анализ является доступным, удобным, специфичным и высокочувствительным экспресс-методом оценки иммунитета поголовья птицефабрики.

2. Использование тест-систем и програмного обеспечения «BioChek» позволяет составить объективную эпизоотическую ситуацию в каждом хозяйстве/стаде, хранить и анализировать всю имеющуюся информацию, а также наблюдать изменение титров во времени.

3. Применение серологического мониторинга очень важно для составления эффективных программ вакцинации, контроля титров в стаде и их сравнения с целевыми титрами.

4. ИФА мониторинг — важный инструмент для снижения производственных издержек, раннего выявления возможных заболеваний.

Для более подробной информации обращайтесь к официальному дистрибьютору компании «BioChek» в России: ООО «Симбио», г. Москва, тел. (495) 984-53-11.

Количество показов: 10731
Автор:  А.А. Черников, технический консультант компании «БиоЧек» в странах СНГ, А.В. Клинков, ООО «Симбио», "ЦЕНОВИК" февраль 2012