ОВОПУЛЬС

03.07.2026

Разработка метода быстрого конструирования рекомбинантного вируса энтерита уток на основе технологии HDR-CRISPR/Cas9

DOI: http://dx.doi.org/10.5555/20250010721

Авторы: Jia, Wenfeng; Jiang, Xiangxiang; Tao, Huili; Wang, Anping; Wu, Zhi; Zhu, Shanyuan.

Публикация: China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, том 52, № 1, с. 298–309 (2025).

Язык оригинала: китайский.

Аннотация

Целью данного исследования была разработка быстрого и точного метода направленной вставки экзогенных генов в геном вируса энтерита уток (Duck Enteritis Virus, DEV) с использованием технологии редактирования генома HDR-CRISPR/Cas9 в оптимизированных условиях, чтобы создать основу для разработки рекомбинантных вакцин с использованием DEV в качестве вирусного вектора. Результаты ПЦР-амплификации и секвенирования подтвердили успешное получение плазмиды gRNA-Cas9, направленной на некодирующую область между генами UL27 и UL26 генома DEV, а также донорной плазмиды, содержащей эукариотическую экспрессионную кассету EGFP. В данном исследовании был разработан метод быстрого получения рекомбинантного DEV с использованием технологии редактирования генома HDR-CRISPR/Cas9. Был успешно получен рекомбинантный вирус rDEV-EGFP, характеризующийся хорошей генетической стабильностью и способностью к репликации in vitro. Разработанный подход создаёт теоретическую основу и технологическую платформу для дальнейшей разработки рекомбинантных векторных вакцин на основе вируса энтерита уток.

Можно ли сократить создание новой векторной вакцины с длительного процесса селекции рекомбинантного вируса до точного редактирования его генома?

Китайские исследователи разработали метод быстрого конструирования рекомбинантного вируса энтерита уток DEV с использованием технологии HDR-CRISPR/Cas9. В качестве участка для генетической модификации была выбрана некодирующая область между генами UL27 и UL26, куда исследователи направленно встроили экспрессионную кассету EGFP. В результате был получен рекомбинантный вирус rDEV-EGFP, который сохранял способность к репликации in vitro и демонстрировал генетическую стабильность. В данном случае EGFP выполняет роль модельного гена, но принципиально вместо него потенциально может быть встроен ген целевого антигена другого возбудителя. Наиболее важен здесь не сам рекомбинантный DEV, а изменение технологии создания векторных вакцин. CRISPR/Cas9 позволяет перейти от относительно трудоемкого получения рекомбинантов к направленному редактированию заранее выбранного участка вирусного генома. Особенно интересно сопоставить эту работу с недавним исследованием вирулентности DEV, где была обнаружена область генома, удаление которой приводило к полной аттенуации вируса. Вместе эти исследования формируют следующую концепцию: определить безопасный участок генома → направленно модифицировать его → встроить необходимые антигены → получить аттенуированный поливалентный вектор. CRISPR/Cas9 постепенно становится не только исследовательским инструментом, но и технологией конструирования вакцинных платформ. Для DEV это открывает путь к рациональному созданию рекомбинантных векторов, способных в перспективе одновременно нести антигены нескольких значимых инфекций птицы.

OVOPULSE — экспертная платформа IN OVO

Количество показов: 57
Автор:  Jia, Wenfeng; Jiang, Xiangxiang; Tao, Huili; Wang, Anping; Wu, Zhi; Zhu, Shanyuan