Ветеринария

07.10.2025

Изучение иммуногенной активности вакцины против гриппа птиц Н5 с разными адъювантами серии Montanide

Введение

Вирус гриппа птиц представляет угрозу здоровью животных и человека [Simancas-Racines A. et al., 2025]. Подтипы H5 и H7 стали причиной многочисленных вспышек заболевания среди диких и домашних птиц и гибели по меньшей мере 600 млн сельскохозяйственных птиц с 2005 г. Многие страны в настоящее время озабочены разработкой и применением различных стратегий борьбы с гриппом птиц. В отличие от подтипов вируса H5N2, H5N3, H5N4, H5N5 и H5N6, которые обнаруживали на довольно ограниченной территории или в пределах континента, вирус подтипа H5N1 положил начало масштабному межконтинентальному распространению [ФАО, 2024]. Подтип вируса H5N1 стал причиной значительного количества вспышек заболевания во многих странах Европы, Африки, Азии и Америки [WOAH, 2025]. Вспышки высокопатогенного гриппа птиц (ВПГП) H5N1, H5N6 и H5N8 линии A/Goose/Guandong/1/96 широко распространились по Азии, Европе, Африке и Северной Америке [Lin S. et al., 2024; Tabynov K. et al., 2024, Chen J. et al., 2022; Shi W., Gao G.F., 2021].

В последние годы некоторые штаммы вируса ВПГП адаптировались к новым видам млекопитающих, что делает возможным приобретение вирусом набора дополнительных адаптивных мутаций. Передача вируса гриппа птиц млекопитающим, в том числе людям, может стать первым шагом на пути к будущей пандемии. Адаптивные мутации в ходе эпизоотии могли увеличить приспособленность вируса  за счет повышенной активности полимеразы, чтобы обеспечить передачу менее восприимчивым хозяевам. Это демонстрируют результаты как экспериментальных заражений, так и выделения вируса ВПГП у нетипичных хозяев в дикой природе и сельском хозяйстве во время вспышек заболевания: распространение вируса ВПГП подтипа H5N1 на фермах среди свиней в Индонезии, передача вируса крупному рогатому скоту и козам в США [Arruda B., 2024]. Явные изменения в эпидемиологии и экологии вируса гриппа в настоящее время представляют собой угрозу здоровью животных, общественному здравоохранению, продовольственной безопасности и биоразнообразию. Традиционные меры контроля, такие как биобезопасность, стемпинг-аут и ограничение передвижения, хотя и являются важными, могут оказаться недостаточными.

Экологические и эпизоотологические изменения, вызванные вспышками гриппа птиц в последние годы, поставили под сомнение исключительность программ санитарного убоя. Международные организации (ВОЗЖ, European Food Safety Authority, European Commission) допускают, что профилактическая вакцинация позволит свести к минимуму количество вспышек и продолжительность эпизоотии. Применение вакцин может снизить риск распространения гриппа птиц на новые виды животных и уменьшить потенциальные убытки [Жильцова М.В., 2025].

Эффективность вакцинопрофилактики против ВПГП находится в прямой зависимости от качества используемых иммунобиологических препаратов.

Противогриппозные вакцины должны быть безвредны, высокоэффективны и обеспечивать стойкий и длительный иммунитет. Особую роль при борьбе с ВПГП в эпизоотических очагах играет скорость наступления иммунитета у вакцинированной птицы. Для эффективности вакцин против гриппа большое значение имеет выбор адъюванта. Адъюванты усиливают защитные свойства вакцины, оптимизируя презентацию и распознавание антигена, но самое главное — обеспечивают продолжительный иммунный ответ. В качестве адъювантов для птицы обычно используют масляные эмульсии, водные растворы и наночастицы. Каждый из перечисленных комплексов применяется для усиления иммунного ответа и предназначен для разных (парентеральный или мукозальный) путей доставки антигена. Например, адъюванты на основе минерального масла, такие как Montanide ISA71 R VG и ISA 78 VG, вызывают сильный гуморальный и клеточный ответ, а адъюванты на водной основе, такие как Montanide GEL P PR, оптимизированы для удобства введения и снижения реактогенности [He Y., 2024].

В связи с высокой эпизоотической опасностью и значительным экономическим ущербом вируса ГП подтипа Н5 для птицеводства необходимо постоянно совершенствовать средства профилактики болезни. Инактивированные вакцины — это основное средство для профилактики болезни, поэтому изучение новых адъювантов в составе данных вакцин стало актуальной задачей. Одними из современных адъювантов являются масляные адъюванты с иммуностимуляторами в составе, например Montanide ISA 78 VG, который и использовался нами в этой работе.

Материалы и методы

Антиген вируса гриппа птиц Н5. В качестве антигена вируса гриппа птиц Н5 использовали суспензию инактивированного вируса низкопатогенного гриппа птиц (НГП) производственного штамма «Ямал» с активностью 9,5 lg ЭИД₅₀/см³ и 9 log₂ гемагглютинирующих единиц (ГАЕ).

Адъювант. В качестве адъювантов использовали масляные адъюванты фирмы SEPPIC торговых названий Montanide ISA 70VG и Montanide ISA78VG. Эти адъюванты при смешивании с дисперсной фазой создают эмульсию типа «вода в масле».

Изготовление вакцин. Используемые адъюванты объединяли с суспензией антигена вируса гриппа H5 в весовом соотношении 70 : 30 и эмульгировали при помощи лабораторного гомогенизатора таким образом, чтобы в прививном объеме (0,5 см³ ) обоих препаратов концентрация антигена составляла 7 log₂ ГАЕ.

Методика опыта. Цыплят яичного кросса в 30-суточном возрасте разделили на три группы по 30 голов в каждой. Цыплят первой группы привили вакциной на основе адъюванта Montanide ISA 70VG (далее по тексту — группа ISA70), цыплят второй группы привили вакциной на основе Montanide ISA78VG (далее по тексту — группа ISA78), цыплят третьей группы не прививали (контроль). Вакцины вводили птице внутримышечно в бедро в прививном объеме 0,5 см³ .

Через 6, 12 и 21 сут. после иммунизации у цыплят отбирали кровь и исследовали на наличие антител к вирусу ГП Н5 в РТГА и по 10 голов цыплят каждой опытной группы заражали вирусом высокопатогенного гриппа птиц (ВПГП) изолят A/duck/ Rostov/113/25(H5N1) в дозе 6,0 lg ЭИД₅₀/см³ на голову методом выпаивания с водой.

Срок наблюдения за зараженными цыплятами составил 7–8 дней, в течение которых проводили клинический контроль. Через 7–8 дней после заражения от выживших цыплят отбирали кровь для исследования на наличие антител к вирусу ГП Н5. Обработка экспериментальных данных. Использовали общепринятые способы обработки выборок варьирующих переменных (определяли средние значения, стандартные отклонения и стандартные ошибки средних).

Полученные данные и обсуждение

В табл. 1 представлены результаты оценки протективной активности вакцин против ГП Н5 на основе разных адъювантов в разные сроки после вакцинации.

Таблица 1

Результаты контрольного заражения вирусом ГП Н5N1 птиц, иммунизированных вакцинами на основе вирусного антигена НГП Н5 и разных адъювантов

Из данных, представленных в табл. 1, видно, что через шесть дней после вакцинации у отобранных из каждой группы цыплят во всех группах (и в контроле и у привитых особей) отсутствовал протективный иммунитет, все цыплята погибли с клиническими признаками гриппа. Однако через 12 дней после иммунизации при контрольном заражении защита в группе ISA70 составила 30% (выжили 3 из 10 птиц), а в группе ISA78 — 100% (10 из 10 птиц были клинически здоровы). Через 21 день данный показатель составил 80% для группы ISA70 (8 из 10 птиц были защищены при контрольном заражении) и 100% для ISA78 (выжили 10 из 10 птиц). В табл. 2 представлены результаты определения гуморального иммунитета к вирусу гриппа птиц подтипа Н5 в РТГА у опытных и контрольных цыплят.

Таблица 2

Результаты оценки гуморального иммунитета птиц, вакцинированных против ГП Н5 препаратами на основе разных адъювантов

Из данных табл. 2 следует, что через шесть дней после вакцинации у цыплят практически отсутствовали антитела против ГП Н5, через 12 дней в группах вакцинированных цыплят титры антител в группах ISA70 и ISA78 составили 6,4 и 8,1 log₂ соответственно, а через 21 день — 7,1 и 9,1 log₂ . При анализе уровня титров антител у вакцинированных цыплят было установлено, что в группе ISA78 они были выше как абсолютно, так и статистически с высокой степенью достоверности, при Р<0,02 и в защитных уровнях появлялись намного раньше, чем в группе ISA70. 

Применение вакцины на основе адъюванта Montanide ISA 78 VG вызывала быстрое развитие иммунного ответа (100%-ная защита развивалась уже через 12 дней после вакцинации) и приводила к формированию наиболее высоких титров антител в РТГА (9,1 log₂ ). Таким образом, по основным иммуногенным свойствам (протекция, титры антигемагглютинирующих антител) вакцина на основе адъюванта ISA78 превосходила вакцину ISA70. 

Наши данные согласуются с данными Kairat Tabynov с соавт. в части надежного уровня протекции и высоких титров антигемагглютинирующих антител, формируемых вакциной против ГП Н5 на основе адъюванта Montanide ISA78 VG, по сравнению с адъювантом ISA7 1 R VG [Tabynov K, 2025]. 

Похожие данные по надлежащей эффективности адъюванта Montanide ISA78 VG в составе вакцины против ньюкаслской болезни были получены Nurlan Akmyrzayev et al. (2025) в плане скорости и напряженности наступления иммунитета, который формировался через 14 дней после вакцинации. 

Заключение 

Вакцина против ГП Н5 на основе адъювантов серии Montanide, формирующих эмульсию типа «вода– масло», оптимальна для формирования напряженного иммунитета против ГП Н5. Однако вакцина на основе адъюванта Montanide ISA 78VG является наиболее эффективным препаратом для профилактики ГП Н5, поскольку ее использование значительно быстрее формирует противовирусный барьер организма, что особенно важно при создании профилактических зон в очагах при борьбе с высокопатогенным гриппом птиц.

Количество показов: 1615
Автор:  Н. Мороз, Д. Долгов, Е. Курненкова, И. Комаров, С. Фролов, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» . (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), г. Владимир